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A pandemia da COVID19 é o principal problema de Saúde pública mundial. Por ser uma doença grave com uma alta transmissibilidade, Indígenas estão imunologicamente suscetíveis aos vírus que nunca circularam antes, como é o caso do SARS-CoV-2, aumentando o impacto que este vírus pode ocasionar nestas comunidades. Estado de Mato Grosso do Sul tem a segunda maior população indígena do país, a realização deste estudo oportunizou o conhecimento da transmissão do SARS-CoV-2, possibilitando melhor entendimento do perfil de transmissão deste vírus nesta população, a soroprevalência, bem como os fatores de prognósticos para gravidade e óbito. Com este estudo, foi possível avaliar a quantidade de casos assintomáticos e se as características genéticas do vírus interferem na gravidade da doença. Além disso, permitiu entender se pacientes que já tiveram a COVID-19 estão protegidos em uma segunda exposição ao vírus.

Proposta de estudo

A proposta deste é analisar os indivíduos sintomáticos para COVID-19 através de analise de swab nasal para realização de exames de biologia molecular, por meio de reação em cadeia de polimerase (do inglês, PCR – Polymerase Chain Reaction) e/ou amostra de sangue para exames de detectam anticorpos IgM/IgG contra SARS-CoV-2 considerado teste rápido (point of care). Apos TCLE e/ou TALE foram coletado amostra de sangue para ensaios sorológicos e imunofenotípicos, com até 15 dias após o inicio dos sintomas 


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Desenvolvimento do Projeto

Dos pacientes testados positivamente, foram
divididos em três grupos definidos de acordo com as condições clínicas leve (tratamento domiciliar), moderada (internação) e grave (óbito), além de um grupo controle de indivíduos soronegativos e assintomáticos.

O monitoramento transcorreu ao longo de 24 meses sobre a permanência e concentração de anticorpos contra SARS-CoV-2 sendo realizado por ELISA com coleta de sangue por 12 e 24 meses após o diagnóstico.

Para determinar o percentual de infecções assintomáticas ou subclínicas com SARS-CoV-2, foram recrutados 487 participantes. Amostras foi calculada com prevalência de 50% de infecção pregressa, precisão de 5% e população de 15.800 indivíduos, acrescentado 30% de perda, resultando em 487 indivíduos.

As coletas foram realizadas por uma equipe de saúde treinada. Pela qual, ficou à disposição do Polo base de Dourados o suporte para as ações de vigilância em saúde. O deslocamento dos profissionais de saúde vinculados a pesquisa ao território ocorreu por meio dos recurso deste projeto. As coletas de sangue foram realizadas semanalmente ou quando houveram casos positivos para SARS-CoV-2.

Experimentos

Células envolvidas nas respostas imunes específicas à vírus, concentrações de imunoglobulinas M (IgM) e G (IgG) foram caracterizadas por imunofenotipagem através da técnica de citometria de fluxo. O perfil de apresentação das respostas imunológicas
foram confrontado com as condições clínicas e com marcadores de ancestralidade dos pacientes avaliados.

Foram analisados um painel com 61 marcadores informativos de ancestralidade, já validados para a população brasileira. Os polimorfismos foi analisado utilizando PCR multiplex e eletroforese capilar em sequenciador automático ABI3130xl.

O RNA do vírus extraído, o cDNA foi obtido com o auxílio do SuperScriptTM III PlatinumTM One-Step qRT-PCR Kit e submetido ao sequenciamento utilizado a plataforma Illumina. Os resultados do sequenciamento foram analisado através de ferramentas de bioinformática que permitirão identificar as características genéticas do SARS-CoV-2.

Riscos e benefícios da pesquisa

Os riscos restringiram a algum tipo de desconforto durante a coleta de material, onde os pacientes poderiam sentir uma pequena sensação de desconforto no local da picada da agulha, sendo  minimizado por ser coletado por profissionais devidamente treinados para a coleta de sangue e realizado com agulhas de pequeno calibre. Se houvesse algum mal-estar, os pacientes recebiam cuidados da equipe de saúde. Esta coleta foram realizada pelos profissionais de saúde indígena, conforme logística instituída pelos serviços de saúde. A participação na pesquisa poderia causar lembranças negativas, ou até mesmo eventuais riscos relacionados a vulnerabilidade das comunidades indígenas com o conhecimento das características da resposta immune geradas pela doença, e com isso dano psicológico. Para minimizar tais riscos, garantimos assistência integral e gratuita a danos causados em decorrência do estudo. O participante tem garantido pela resolução do Conselho Nacional de Saúde no 466 de 2012, direito de buscar indenização e ressarcimento decorrentes da pesquisa caso se sinta lesado ou prejudicado. O pesquisador principal se responsabilizam por futuras indenizações e ressarcimentos que possam ocorrer decorrente dessa pesquisa, conforme previsto na legislação brasileira.

Considerações éticas

Os pacientes que assinaram o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido (TCLE) ou Termo de Assentimento Livre e Esclarecido (TALE) foram incluídos no estudo. O TCLE e TALE foram enviados via WatsApp e para aqueles que não foi possível obter essa forma de Consentimento, enviamos o documento em sacos plásticos, devidamente higienizados e lacrados pelos profissionais de saúde disponibiliados ao DSEI Polo-base de Dourados. O projeto foi submetido ao Comitê de Ética e Pesquisa em Seres Humanos da Universidade Federal do Mato Grosso do Sul e à Comissão Nacional de Ética em Pesquisa (CONEP). A pesquisa seguiram a Resolução 466 de 12 de dezembro de 2012 do Conselho Nacional de Saúde, resguardando a identidade dos participantes e utilizando apenas as variáveis necessárias para a realização do estudo. Todos os indivíduos incluídos no estudo não poderão ser identificados, nem utilizados para outros propósitos que não estejam descritos nesse projeto. 

Assistência à Saúde

Foi realizado uma colaboração com os serviços de saúde locais, incluindo o DSEI, e Secretarias de Saúde. Os casos identificados foi prontamente notificados para que as medidas cabíveis fosse tomada. Os desfechos dos casos atendidos como tratamento domiciliar, internação e óbito foram avaliados através dos dados notificados.

Galeria de Fotos

Processamento de amostras

Processamento de amostras

Processamento de amostras

Encontro com a Secretaria de saúde do municipio de Dourados, para devolutiva dos resultados das pesquisas

Reunião no Distrito Sanitário Especial Indígena para repasse dos resultados alcançados

Instituições colaboradoras

Grupo de Pesquisa em Biologia Molecular de Microrganismos

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(Atrás da piscina)

Dourados, MS

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