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Proposta de estudo

A proposta deste é analisar os indivíduos sintomáticos para COVID-19 através de analise de swab nasal para realização de exames de biologia molecular, por meio de reação em cadeia de polimerase (do inglês, PCR – Polymerase Chain Reaction) e/ou amostra de sangue para exames de detectam anticorpos IgM/IgG contra SARS-CoV-2 considerado teste rápido (point of care). Apos TCLE e/ou TALE foram coletado amostra de sangue para ensaios sorológicos e imunofenotípicos, com até 15 dias após o inicio dos sintomas 


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Desenvolvimento do Projeto

Dos pacientes testados positivamente, foram
divididos em três grupos definidos de acordo com as condições clínicas leve (tratamento domiciliar), moderada (internação) e grave (óbito), além de um grupo controle de indivíduos soronegativos e assintomáticos.

O monitoramento transcorreu ao longo de 24 meses sobre a permanência e concentração de anticorpos contra SARS-CoV-2 sendo realizado por ELISA com coleta de sangue por 12 e 24 meses após o diagnóstico.

Para determinar o percentual de infecções assintomáticas ou subclínicas com SARS-CoV-2, foram recrutados 487 participantes. Amostras foi calculada com prevalência de 50% de infecção pregressa, precisão de 5% e população de 15.800 indivíduos, acrescentado 30% de perda, resultando em 487 indivíduos.

As coletas foram realizadas por uma equipe de saúde treinada. Pela qual, ficou à disposição do Polo base de Dourados o suporte para as ações de vigilância em saúde. O deslocamento dos profissionais de saúde vinculados a pesquisa ao território ocorreu por meio dos recurso deste projeto. As coletas de sangue foram realizadas semanalmente ou quando houveram casos positivos para SARS-CoV-2.

Experimentos

Células envolvidas nas respostas imunes específicas à vírus, concentrações de imunoglobulinas M (IgM) e G (IgG) foram caracterizadas por imunofenotipagem através da técnica de citometria de fluxo. O perfil de apresentação das respostas imunológicas
foram confrontado com as condições clínicas e com marcadores de ancestralidade dos pacientes avaliados.

Foram analisados um painel com 61 marcadores informativos de ancestralidade, já validados para a população brasileira. Os polimorfismos foi analisado utilizando PCR multiplex e eletroforese capilar em sequenciador automático ABI3130xl.

O RNA do vírus extraído, o cDNA foi obtido com o auxílio do SuperScriptTM III PlatinumTM One-Step qRT-PCR Kit e submetido ao sequenciamento utilizado a plataforma Illumina. Os resultados do sequenciamento foram analisado através de ferramentas de bioinformática que permitirão identificar as características genéticas do SARS-CoV-2.

Riscos e benefícios da pesquisa

Os riscos restringiram a algum tipo de desconforto durante a coleta de material, onde os pacientes poderiam sentir uma pequena sensação de desconforto no local da picada da agulha, sendo  minimizado por ser coletado por profissionais devidamente treinados para a coleta de sangue e realizado com agulhas de pequeno calibre. Se houvesse algum mal-estar, os pacientes recebiam cuidados da equipe de saúde. Esta coleta foram realizada pelos profissionais de saúde indígena, conforme logística instituída pelos serviços de saúde. A participação na pesquisa poderia causar lembranças negativas, ou até mesmo eventuais riscos relacionados a vulnerabilidade das comunidades indígenas com o conhecimento das características da resposta immune geradas pela doença, e com isso dano psicológico. Para minimizar tais riscos, garantimos assistência integral e gratuita a danos causados em decorrência do estudo. O participante tem garantido pela resolução do Conselho Nacional de Saúde no 466 de 2012, direito de buscar indenização e ressarcimento decorrentes da pesquisa caso se sinta lesado ou prejudicado. O pesquisador principal se responsabilizam por futuras indenizações e ressarcimentos que possam ocorrer decorrente dessa pesquisa, conforme previsto na legislação brasileira.

Considerações éticas

Os pacientes que assinaram o Termo de Consentimento Livre e Esclarecido (TCLE) ou Termo de Assentimento Livre e Esclarecido (TALE) foram incluídos no estudo. O TCLE e TALE foram enviados via WatsApp e para aqueles que não foi possível obter essa forma de Consentimento, enviamos o documento em sacos plásticos, devidamente higienizados e lacrados pelos profissionais de saúde disponibiliados ao DSEI Polo-base de Dourados. O projeto foi submetido ao Comitê de Ética e Pesquisa em Seres Humanos da Universidade Federal do Mato Grosso do Sul e à Comissão Nacional de Ética em Pesquisa (CONEP). A pesquisa seguiram a Resolução 466 de 12 de dezembro de 2012 do Conselho Nacional de Saúde, resguardando a identidade dos participantes e utilizando apenas as variáveis necessárias para a realização do estudo. Todos os indivíduos incluídos no estudo não poderão ser identificados, nem utilizados para outros propósitos que não estejam descritos nesse projeto. 

Assistência à Saúde

Foi realizado uma colaboração com os serviços de saúde locais, incluindo o DSEI, e Secretarias de Saúde. Os casos identificados foi prontamente notificados para que as medidas cabíveis fosse tomada. Os desfechos dos casos atendidos como tratamento domiciliar, internação e óbito foram avaliados através dos dados notificados.

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Grupo de Pesquisa em Biologia Molecular de Microrganismos

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(Atrás da piscina)

Dourados, MS

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